解析新型CD28 x PD-L1双抗，释放CD28潜能

尽管免疫检查点抑制剂在癌症治疗中取得了进展，但仍有大量患者对这些治疗产生耐药或复发。因此，开发新的治疗策略，如通过双特异性抗体选择性激活T细胞共刺激分子，显得尤为重要。

CD28是T细胞上表达的主要共刺激受体，与抗原呈递细胞上的CD80/CD86结合后，主要作为“第二信号”强化激活T细胞的“第一信号”，激活下游信号通路，包括活化T细胞的核因子（NFAT），激活蛋白1（AP-1）和核因子-κB（NF-κB），分泌IL-2等细胞因子，并诱导抗凋亡蛋白的表达，从而促进T细胞增殖和存活。

CD28在静息状态和激活的T细胞上均有组成性表达，包括大约80%的人类CD4+T细胞和50%的CD8+T细胞。此外，CD28在其他细胞系上也有表达，包括骨髓基质细胞、浆细胞、中性粒细胞和嗜酸性粒细胞，但CD28在这些细胞上的功能重要性尚不完全清楚。

CD28作为免疫治疗靶点的道路并非一帆风顺。此前，CD28激动剂抗体在早期临床试验中曾导致严重不良事件，这使得CD28靶点的开发一度陷入困境。近年来，双特异性抗体技术的兴起为CD28靶点的开发带来了新的转机。

Novimmune开发了一种新型的PD-L1xCD28双特异性抗体NI-3201，实现双重机制作用，旨在通过同时阻断PD-L1/PD-1免疫检查点通路和条件性激活CD28共刺激信号来增强T细胞的抗肿瘤功能。最新的研究成果发表在了《cancer Immunology Research》上。NI-3201的设计基于κλ-body平台，包含一个阻断PD-L1的臂（S79）和一个激动CD28的臂（AI3），重链采用了其独创的共重链技术，CD28和PD-L1轻链分别采用了κ和λ轻链防止错配。

体外实验结果显示，NI-3201在体外实验中显示出对T细胞的激活能力，能够增强T细胞的细胞毒性功能，并表现出PD-L1依赖性的CD28激活效应，在抗原特异性记忆性实验中促进T细胞的增殖。体内实验进一步证实了其在多种小鼠模型中的抗肿瘤活性和免疫记忆形成能力。此外，非人灵长类动物的安全性评估显示NI-3201具有良好的耐受性和药代动力学特性。定量系统药理学（QSP）模型预测了其在患者中的潜在疗效，支持其临床开发前景。

NI-3201作为一种新型双特异性抗体，展示了其在癌症免疫治疗中的潜力，有望改善当前治疗的局限性，并为PD-L1阳性实体瘤患者提供新的治疗选择。研究结果支持NI-3201进入临床开发阶段，预计将在2025年上半年开始临床试验。

此外，2024年12月4日，Rondo Therapeutics（“Rondo”）宣布，公司已与礼来公司达成研究合作和许可协议。双方将Rondo专有的 CD28 共刺激平台与礼来的药物开发和商业化专业知识相结合，共同开发用于实体瘤的共刺激双特异性抗体。

根据协议条款，Rondo将获得一笔未披露的预付款，并有资格获得额外的开发和商业里程碑付款，以及商业销售的分级特许权使用费。

Rondo Therapeutics是一家以开发双特异性抗体为核心的生物制药公司，其CD28共刺激平台是该公司成功的关键之一。通过将CD28作为共刺激分子，Rondo期望能够增强T细胞对肿瘤的攻击力。这一突破性的技术在之前的治疗研究中显示出了良好的前景，而与Lilly的合作无疑将加速这一技术的临床应用。

百奥泰最新PCT专利披露了其新型PD-L1/CD28双抗的构建策略，通过在重链（HC）和轻链（LC）C末端分别融合CD28 scFv，筛选出两种结构不同的双抗分子。实验数据显示，所有构建的双抗（包括基于CD28克隆2D6和2D8的版本）均显著优于单药组分——单独PD-L1抗体仅微弱激活Jurkat T细胞，而CD28单抗几乎无活性，但双抗能高效激活T细胞。安全性评估表明，相比阳性对照TGN1412，该双抗诱导的PBMC细胞因子释放更少，预示临床细胞因子风暴风险较低。机制上，双抗的激活严格依赖"双信号"：仅在抗CD3刺激（第一信号）和PD-L1+肿瘤细胞（如MC38）共存的条件下，才能强烈激活CD28-NF-κB-Jurkat细胞，展现高度特异性。体内实验进一步证实其强效抑瘤作用。

目前，已有多种基于双抗的研究处于临床阶段。除了靶向CD28和PD-L1之外，针对其他免疫检查点的双抗也是一个热门的研究领域，包括但不限于：

• 蛋白均一结构及高纯度（＞90%）经MALS验证

The purity of Human / Cynomolgus / Rhesus macaque CD28 Protein, His Tag (Cat. No. CD8-H52H3) is more than 90% and the molecular weight of this protein is around 65-75 kDa verified by SEC-MALS.

• 高生物活性经ELISA验证

Immobilized Biotinylated Human / Cynomolgus / Rhesus macaque CD28, His,Avitag (Cat. No. CD8-H82E5) at 1 μg/mL (100 μL/well) on Streptavidin (Cat. No. STN-N5116) precoated (0.5 μg/well) plate can bind Human B7-1, Fc Tag (Cat. No. B71-H5259) with a linear range of 0.2-3 ng/mL (QC tested).

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Immobilized Monoclonal Anti-Human CD28 Antibody, Mouse IgG1 at 5 μg/mL (100 μL/well) can bind Biotinylated Human / Cynomolgus / Rhesus macaque CD28, His,Avitag (Cat. No. CD8-H82E5) with a linear range of 0.08-2 ng/mL (Routinely tested).

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• 高生物活性经BLI验证

Loaded Human B7-1, Fc Tag (Cat. No. B71-H5259) on Protein A Biosensor, can bind Human / Cynomolgus / Rhesus macaque CD28 Protein, His Tag (Cat. No. CD8-H52H3) with an affinity constant of 4.5 μM as determined in BLI assay (ForteBio Octet Red96e) (Routinely tested).

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